Principe de la coloration Gram

La coloration de Gram est la méthode de coloration la plus utilisée en bactériologie médicale; elle permet de colorer les bactéries et de les distinguer à l’examen direct par leur aptitude à fixer le violet de gentiane (Gram +) ou la fuschine (Gram -). L’intérêt de cette coloration est de donner une information rapide et médicalement importante.

 

 

 

 

 

 

 

 

Cette coloration nécessite tout d’abord la fixation de la bactérie sur une lame (frottis)

1- Etalement: Avec une anse de platine stérilisée à la flamme du bec, étaler en un film mince et régulier une goutte de bouillon.

2- Stériliser l’anse de platine à la flamme du bec

3- Séchage du frottis: Laisser sécher la lame en la maintenant dans l’air chaud de la veilleuse du bec bunsen.

La technique de coloration

1-La coloration primaire:  Recouvrir de violet de gentiane en versant le colorant en bout de lame et en le faisant glisser le long de la lame. Laisser agir de 30 secondes à 1 minute. Rincer à l’eau déminéralisée pour éliminer l’excédent de colorant.

2- La fixation au lugol: Pencher la lame et éliminer le violet de gentiane en faisant couler sur la lame la solution de lugol. Laisser agir 30 secondes. Rincer à l’eau déminéralisée  pour éliminer l’excédent de lugol.

3-La décoloration à l’alcool: Verser quelques gouttes d’alcool sur le frottis tenu verticalement jusqu’à ce que l’alcool s’écoule non teinté (5 secondes environ). Rincer avec un jet de pissette d’eau déminéralisée. Nettoyer le dessous de la lame à l’alcool puis à l’eau.

4-La coloration secondaire: Recolorer par de la fuschine en versant le colorant en bout de lame et en le faisant glisser le long de la lame.  Ne pas verser la fuschine sur le frottis pour éviter une coloration trop intense. Laisser agir de 10 secondes à 20 secondes. Rincer avec un jet de pissette d’eau déminéralisée. Laisser sécher.